CTL(Cellular Technology Limited)是全球首批将 ELISPOT/FluoroSpot 技术商业化的创新企业。公司由免疫学家 Alexander Sette 博士与 Paul Lehmann 博士创立,是 ELISPOT 自动化仪器的开创者和行业标准制定者。CTL 的技术和产品已在全球范围内广泛应用于疫苗研发、肿瘤免疫疗法评估、细胞治疗及免疫基础研究。
ELISPOT 技术(Enzyme-Linked ImmunoSpot)以单个细胞为检测单位,在膜底预包被特异性抗体,用于捕获每个细胞分泌出的细胞因子或抗体。经过酶反应显色后,细胞分泌的物质在膜上留下一个个清晰的“斑点”——每一个斑点代表一枚分泌活跃的细胞,而斑点的大小与颜色深浅则对应了该细胞的分泌量。

ELISPOT检测T细胞分泌活性
1. 预包被抗体:将特异性抗体预包被在96孔板的PVDF或硝酸纤维素膜上,用于捕获目标蛋白;
2. 细胞培养与刺激:将待检测细胞加入孔板中,并用抗原或刺激物激活细胞,使其分泌目标蛋白。
3. 蛋白捕获:分泌的蛋白被孔板底部的抗体捕获并固定。
4. 检测抗体:加入与目标蛋白特异性结合的二抗(通常与酶结合),形成抗体复合物。
5. 显色反应:加入底物后,酶催化反应生成可见的色斑或荧光斑点每个斑点代表一个分泌目标蛋白的单细胞。
6. 计数与分析:使用lmmunospot分析仪对斑点进行计数和分析,从而评估细胞的活性和分泌能力。

Elispot检测流程示意图
CTL(Cellular Technology Limited) 的 ImmunoSpot ELISPOT/FluoroSpot 平台将这一过程推向极致,可以提供一套完整的套装,包含捕获和检测抗体、酶或荧光检测试剂、稀释缓冲液、无血清T细胞检测培养基以及PVDF膜板。
CTL的ImmunoSpot ELISPOT技术具有如下优势:
这一技术让研究者得以从单个细胞层面洞察免疫系统的真实反应,为 疫苗研发、免疫治疗评估、自身免疫疾病研究 提供了不可替代的研究手段。
目前,随着免疫疗法与疫苗研发的飞速发展,全球监管机构也日益重视细胞免疫相关数据。在药物与疫苗的临床申报中,FDA(美国食品药品监督管理局) 已明确要求企业提供T细胞免疫应答等功能性检测数据,以验证候选药物或疫苗能否真正激活细胞免疫系统。
而ELISPOT/FluoroSpot 技术已成为最常用、最具认可度的实验方法之一,尤其IFN-γ ELISPOT检测方法,更是成为评估疫苗引起的细胞免疫效应的“金标准”。总之,无论是疫苗免疫原性验证、肿瘤免疫疗法评估,还是自身免疫疾病与感染研究,ELISPOT都不再只是一项科研工具,而是成为了基础研究到临床转化的关键桥梁。
